水產(chǎn)養(yǎng)殖戶弧菌實用檢測方法及實驗器材試劑

一、弧菌檢測器材和試劑 (水產(chǎn)養(yǎng)殖戶簡易實驗室用）
電爐一臺、天平（0.1克）1臺、一次性無菌培養(yǎng)皿（90mm）10個、100ml量筒1個、三角燒瓶500ml1個、500ml燒杯1個、無菌巴氏滴管若干 支 或移液槍一支（配套無菌吸頭）
酒精燈1個、酒精1瓶、三角涂布棒1個或無菌L型涂布棒、玻璃棒1支 、TCBS培養(yǎng)基1瓶、無菌采樣瓶若干（按采樣數(shù)）、接種環(huán) 1支 或一次性無菌接種環(huán)、小型恒溫培養(yǎng)箱  1臺
 
二、樣品采集

1、用無菌采樣瓶采集水下約20cm處水樣，采好的水樣需蓋緊瓶。
2、采得的水樣立即送檢，否則，應(yīng)將樣品置于冰瓶或冰箱中，但也不得超過24h，否則將影響檢驗結(jié)果。  
 
三、檢驗步驟
1、培養(yǎng)基稱量煮沸倒平板  
1） 稱量8.91克TCBS瓊脂粉（可按比例增減）和100ml蒸餾水或純凈水（沒有條件的用冷卻開水或桶裝水），倒入洗凈的三角燒杯中，加熱攪拌，溶解瓊脂粉，直至沸騰。
培養(yǎng)基溶解判定標(biāo)準(zhǔn)：輕搖三角瓶，掛在瓶壁上的液體里沒有顆粒，即為全部溶解。難溶解的顆粒為瓊脂，顆粒溶解不充分的話，制作的培養(yǎng)平板易破，不耐用。

 
2）在滅菌操作臺上，將沸騰后的培養(yǎng)基冷卻到50~60℃，分別倒入一次性無菌培養(yǎng)皿中，每個培養(yǎng)皿約15~20mL，待其冷卻凝固，倒置于超凈工作臺或無菌泡沫箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?br /> 注意：倒好的平板內(nèi)不能有水珠或水層。 ，如平板表面有水珠，可放在25 ℃～50 ℃的培養(yǎng)箱里干燥，直到平板表面的水珠消失。

 
2、菌液接種   
在滅菌操作臺上，用無菌巴氏滴管或（無菌槍頭）取水樣（可稀釋）0.05mL（2~3ml無菌巴氏滴管一滴約50微升），滴入制好的培養(yǎng)皿培養(yǎng)基上，用滅菌的三角涂布棒將菌液涂抹均勻，平放于操作臺上數(shù)分鐘，使菌液滲入培養(yǎng)基。 （沒有超凈工作臺的，應(yīng)選相對潔凈的環(huán)境，現(xiàn)用現(xiàn)配，在火焰旁操作。塑料無菌涂布棒不能靠近酒精燈。）

 
3、弧菌培養(yǎng)  
將接種培養(yǎng)皿倒置恒溫培養(yǎng)箱箱內(nèi)培養(yǎng)，于36 ℃±1 ℃培養(yǎng)18 h～24 h左右，取出計數(shù)菌落。在通常情況下，涂布后，將平板靜置 10 min，如樣液不易吸收，可將平板放在培養(yǎng)箱 36 ℃±1℃培養(yǎng)1 h；等樣品勻液吸收后翻轉(zhuǎn)平皿，倒置于培養(yǎng)箱，
 
如不是在恒溫培養(yǎng)箱用37℃培養(yǎng)，在室溫環(huán)境培養(yǎng)，由于室溫溫差的原因會嚴(yán)重影響弧菌菌落形成的數(shù)量和時間。
 
4、菌落計數(shù)  
分別點數(shù)綠色菌落和黃色菌落數(shù)量，乘取水樣的稀釋倍數(shù)，即可得該水樣的綠色和黃色弧菌總數(shù)。
典型的副溶血性弧菌在TCBS 上呈圓形、半透明、表面光滑的綠色菌落，用接種環(huán)輕觸，有類似口香糖的質(zhì)感，直徑2 mm～3 mm。
注意：選用TCBS作為分離培養(yǎng)各種弧菌的培養(yǎng)基，特異性不是很強(qiáng)；不少細(xì)菌在TCBS上也能生長，但生長較慢，需要培養(yǎng)24h后方可長成0.5~1mm的黃、綠色菌落。為有效排除干擾，及時準(zhǔn)確地判斷出是否存在弧菌屬細(xì)菌，可結(jié)合弧菌屬細(xì)菌在TCBS培養(yǎng)基上生長的特點：弧菌生長快，菌落大，培養(yǎng)4-5h原劃線處有菌苔生長，8-10h可長出小菌落，16h菌落可達(dá)2mm;其他菌在TCBS上則無此特點。因此在篩選弧菌屬細(xì)菌的選擇性培養(yǎng)基時要特別注意在確定的培養(yǎng)時間內(nèi)進(jìn)行菌落的觀察，時間超過即影響其準(zhǔn)確性。

部分弧菌在TCBS培養(yǎng)基上的顏色見：http://www.jc6jd.com/anquan/357.html

 
5、廢物處理  
經(jīng)計數(shù)后不用的培養(yǎng)基，需經(jīng)滅菌煮溶后，方可到人排水溝。
經(jīng)常性檢測蝦塘水體的弧菌密度。要求總弧菌的密度控制在5000菌株/毫升以下，綠弧菌的密度控制在300菌株/毫升以下。
底泥中弧菌數(shù)量遠(yuǎn)超水體中弧菌數(shù)量，有時水體無法檢測出弧菌，底泥中卻依舊含有相當(dāng)多的弧菌。東山地區(qū)建議增加底泥樣品弧菌檢測。

以上圖片來源網(wǎng)絡(luò)。
養(yǎng)殖戶簡單地檢測弧菌，需要的最簡單的弧菌檢測儀器和設(shè)備
   

名稱	規(guī)格型號	數(shù)量	估價（單價）
萬用電爐	泰斯特DK-98-II單聯(lián)	1臺	98.00
天平	0.1g, YP2001B	1臺	260.00 (不同廠家型號價格不同）
小型恒溫培養(yǎng)箱	25*25*25cm 鍍鋅鐵內(nèi)膽	1臺	900.00 （另有不銹鋼內(nèi)膽材質(zhì)）
一次性無菌培養(yǎng)皿	90mm，10個/包，500個/箱	1箱	整箱400元，拆零10元/包
100ml量筒	100ml  亞速旺	1支	28.00
三角燒瓶	500ml  蜀牛	1個	16.00
燒杯	500ml  亞速旺	1個	12.00
無菌巴氏滴管	獨立包裝  每滴約50微升。	20支	100支以下0.8元/支
酒精燈	酒精需要另外購買	1個	8元
玻璃攪拌棒		2支	3元/支
玻璃涂布棒		若干	3元/支
一次性無菌L型涂布棒	10支/包	20支	8元/包  （獨立包裝的1元/支）
一次性無菌接種環(huán)	一次性使用	5支	1元/支
優(yōu)質(zhì)接種環(huán)+接種棒	接種環(huán)可使用上千次。	1支	50元
TCBS培養(yǎng)基	陸橋  250克/瓶	1瓶	130元/瓶
無菌采樣瓶	100ml ，按采樣數(shù)	若干	3元/個
可滅菌采樣瓶60ml	PP材質(zhì)，可高壓滅菌	若干	4.8元/個

 
不同廠家儀器價格不同，另外距離遠(yuǎn)近運費也不同，以上價格為估價，實際以正式報價為準(zhǔn)。
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