海洋水質(zhì)監(jiān)測海水檢測培養(yǎng)基

海洋水質(zhì)監(jiān)測微生物指標(biāo)包括：弧菌、異養(yǎng)細(xì)菌總數(shù)、糞大腸桿菌
       弧菌是海洋中常見菌，近期廣西村民哄搶榴蓮食物中毒事件中的罪魁禍?zhǔn)准词腔【械囊环N--副溶血性弧菌。副溶血性弧菌是一種海洋細(xì)菌，主要來源于魚、蝦、蟹、貝類和海藻等海產(chǎn)品。此菌對酸敏感，在普通食醋中5分鐘即可殺死；對熱的抵抗力較弱，56℃加熱5~10min或90℃加熱1min即可將其滅活。海水中常見的致病弧菌還有創(chuàng)傷弧菌，霍亂弧菌等。為避免弧菌引起的食物中毒，日常海鮮需要煮熟食用，蘸醋有助于殺死弧菌。副溶血性弧菌也是養(yǎng)殖業(yè)中常見的致病菌，檢測弧菌的TCBS培養(yǎng)基加熱煮沸即可使用，養(yǎng)殖戶的簡易實驗室也可以檢測弧菌。
       海洋水質(zhì)監(jiān)測海水檢測培養(yǎng)基包括檢測弧菌的BTB培養(yǎng)基、TCBS培養(yǎng)基、PCA培養(yǎng)基（含氯化鈉）；檢測異養(yǎng)細(xì)菌的2216E瓊脂培養(yǎng)基；檢測糞大腸桿菌的乳糖蛋白胨培養(yǎng)液，EC肉湯、M-TEC培養(yǎng)基等。
 
海水增養(yǎng)殖區(qū)監(jiān)測技術(shù)規(guī)程
.4監(jiān)測項目
4.4.1水質(zhì)監(jiān)測
—— 必測項目：水溫、透明度、化學(xué)需氧量（COD）、pH、溶解氧（DO）、鹽度、無機氮（氨鹽、硝酸鹽、亞硝酸鹽）、活性磷酸鹽、油類、葉綠素-a；
—— 選測項目：總氮、總磷、汞、鎘、鉛、銅、砷、硅酸鹽、數(shù)量、異養(yǎng)細(xì)菌總數(shù)、浮游植物、揮發(fā)酚。
4.4.2沉積物監(jiān)測
—— 必測項目：總汞、鎘、鉛、銅、砷、油類、DDT、多氯聯(lián)苯、硫化物、有機質(zhì)、糞大腸桿菌；
—— 選測項目：異養(yǎng)細(xì)菌總數(shù)、總磷、總氮、底棲生物。
附錄F （規(guī)范性附錄） 沉積物糞大腸桿菌—發(fā)酵法
F.1 樣品預(yù)處理
F.2 分離方法
附錄G （規(guī)范性附錄） 沉積物異養(yǎng)細(xì)菌總數(shù)—平板計數(shù)法
G.1 樣品預(yù)處理
G.2 分離方法
糞大腸桿菌/發(fā)酵法--GB17387.7
弧菌數(shù)量/平板計數(shù)法/參見附錄A
異養(yǎng)細(xì)菌總數(shù)/平板計數(shù)法/GB17387.7
附錄A（規(guī)范性附錄）
弧菌數(shù)量—平板計數(shù)法
A.1培養(yǎng)基
—— 計數(shù)培養(yǎng)基BTB：牛肉膏3.0g， 蛋白胨10.0g，蔗糖15.0g，氯化鈉20.0g，Teepol 1.0g，
溴麝香草酚藍(lán)0.06mg，蒸餾水1000mL。配制方法：將上述數(shù)量的牛肉膏、蛋白胨、蔗糖、氯化鈉和Teepol加熱溶解于1000mL蒸餾水中，
用16%的氫氧化鈉調(diào)整pH為7.8，再將溴麝香草酚藍(lán)按上述量溶解其中。分裝于試管（每管5mL）中，塞棉塞，包裝后于115℃高壓蒸氣滅菌20min，
然后于冰箱中冷藏備用。
—— 平板分離培養(yǎng)基TCBS：蛋白胨10.0g， 酵母膏5.0g，檸檬酸鈉10.0g，硫代硫酸鈉10.0g， 蔗糖20.0g，膽鹽8.0g，
氯化鈉10.0g，檸檬酸鐵1.0g，
溴麝香草酚藍(lán)0.04g，麝香草酚藍(lán)0.04g，瓊脂15g，蒸餾水1000mL。配制方法：將上述數(shù)量的蛋白胨、酵母膏、檸檬酸鈉、硫代硫酸鈉、蔗糖、膽鹽、氯化鈉、檸檬酸鐵、溴麝香草酚藍(lán)和麝香草酚藍(lán)加熱溶解于1000mL蒸餾水中，調(diào)節(jié)pH為8.6，在加熱至沸騰。然后冷卻至55℃，
傾注無菌培養(yǎng)皿即可。該培養(yǎng)基不需要高壓滅菌。
—— PAC斜面培養(yǎng)基（比食品微生物PCA多氯化鈉成分）：蛋白棟5.0g，酵母膏2.5g， 葡萄糖1.0g，氯化鈉10.0g，
瓊脂15.0g，蒸餾水1000mL。配制方法：將上述量蛋白棟、酵母膏、葡萄糖、氯化鈉和瓊脂加熱溶解于1000mL蒸餾水中，
調(diào)節(jié)pH為7.0，分裝于試管（每管5mL）中，
塞棉塞，包裝后于高壓蒸汽滅菌鍋中115℃滅菌20min。滅菌后立即取出裝有上述培養(yǎng)基的試管，傾斜放置于實驗臺面上，使其冷卻后培養(yǎng)基在試管內(nèi)形成斜面。放置冰箱中冷藏備用。
A.2檢測步驟
—— 弧菌的分離和計數(shù)：采用9管“MPN”法以3個不同稀釋度（原水樣、10-1和10-2）的水樣接種于BTB培養(yǎng)液的試管中， 37℃培養(yǎng)18h，
把陽性管中的菌液于TCBS平板上劃線分離， 平板放進(jìn)培養(yǎng)箱里，
于37℃培養(yǎng)18h，將出現(xiàn)的綠色、藍(lán)綠色和黃色菌種接種于PCA斜面上保存。分離菌株首先經(jīng)革蘭氏染色、氧化酶、運動性和0/129弧菌素敏感實驗等，符合弧菌特征的菌株，視其來源的“MPN”管數(shù)，
查“MPN”表進(jìn)行計數(shù)。
—— 弧菌種的鑒定：從TCBS平板上分離的菌株經(jīng)上述4個弧菌屬基本特征鑒別后，采用API20E系統(tǒng)進(jìn)行生理生化特征鑒定，
并做耐鹽性試驗（鹽度為0、3%、6%、8%和10%）， 根據(jù)API20E反應(yīng)結(jié)果， 查API20E檢索表， 即可得到種名 。
注： 除有特殊需要外，注： 可不注： 做第二步。
 
海洋生態(tài)環(huán)境監(jiān)測技術(shù)規(guī)程
附錄B （規(guī)范性附錄） 生物體內(nèi)細(xì)菌學(xué)指標(biāo)檢測技術(shù)
（規(guī)范性附錄）
生物體內(nèi)細(xì)菌學(xué)指標(biāo)檢測技術(shù)
B.1儀器設(shè)備
—— 恒溫培養(yǎng)箱：25℃-44℃；
——干熱滅菌箱；
—— 高壓蒸氣滅菌器；
—— 接種環(huán)；
—— 培養(yǎng)皿：直徑9cm；
—— 試管：12x150mm；
—— 吸量管：1，10ml；
—— 發(fā)酵管：5x30mm；
—— 玻璃刮棒：接種用；
—— 紗布和棉花：塞試管用；
—— 錐形燒瓶；
—— 牛皮紙；
—— 電爐：2000W；
—— 超凈工作臺；
—— 一般實驗常用儀器設(shè)備；
—— 無菌研缽
B.2采樣方法
進(jìn)行細(xì)菌學(xué)指標(biāo)檢測分析的樣品需要無菌采集，并且需要盡快進(jìn)行實驗室檢測分析，不可長時間保藏?，F(xiàn)場采集的生物樣品須在冷藏條件下于6小時內(nèi)送回實驗室進(jìn)行分析。
現(xiàn)場生物樣品采集系用一次性消毒手套采取活生物于無菌朔料袋中，做好標(biāo)記、及時裝入便攜式冷藏箱中。
B.3測試分析方法
B.3.1測試分析方法-發(fā)酵法
B.3.1.1方法原理
大腸菌群系一群在37℃或44℃生長時能使乳糖發(fā)酵、在24h內(nèi)產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧及兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。大腸菌群數(shù)系指單位生物樣中所含有的“大腸菌群”的數(shù)目。一般在37℃培養(yǎng)生長的稱為“總大腸菌群”，在44℃培養(yǎng)生長的稱為“糞大腸菌群”。海洋生物檢驗采用44℃培養(yǎng)法，以檢出糞大腸菌群。
發(fā)酵法系通過初發(fā)酵及復(fù)發(fā)酵二個步驟，以證實生物體中是否存在糞大腸菌群并測定其數(shù)目。
B.3.1.2試劑及培養(yǎng)基配制
a） 試劑配制
1） 溴甲酚紫乙醇溶液
稱取1.6g的溴甲酚紫[C6H4SO2OC（C6H2CH3OHBr）2]溶于2-3mL乙醇（C2H5OH）中，然后用蒸餾水定容到100mL。
2） 碳酸鈉溶液
稱取10.6g碳酸鈉（NaCO3）溶于蒸餾水，并定容到100mL。
b） 乳糖蛋白胨培養(yǎng)基的配制
1）培養(yǎng)液成份
蛋白胨10.0g
牛肉膏3.0g
乳糖5.0g
氯化鈉5.0g
溴甲酚紫乙醇溶液(b)-1))1mL
蒸餾水
 
廈門敏測實驗器材有限公司供應(yīng)以上BTB培養(yǎng)基、TCBS培養(yǎng)基、PCA培養(yǎng)基（含氯化鈉）、2216E瓊脂培養(yǎng)基、 乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、EC肉湯、M-TEC培養(yǎng)基等海洋水質(zhì)監(jiān)測海水檢測培養(yǎng)基。
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