軍團(tuán)菌PCR檢測(cè)試劑盒

【名稱】
通用名稱：軍團(tuán)菌PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱： PCR diagnostic kit for Legionella spp.
【使用方向】
軍團(tuán)菌PCR檢測(cè)試劑盒是快速準(zhǔn)確的定性檢測(cè)水中軍團(tuán)菌數(shù)量的試劑盒，PCR 聯(lián)合酶聯(lián)免疫檢測(cè)擴(kuò)增后樣品的原理，樣品中細(xì)菌濃度達(dá)10³cfu/ml就可是實(shí)現(xiàn)直接檢驗(yàn)。PCR 過(guò)程中，一段特殊的DNA 片段被擴(kuò)增然后通過(guò)和標(biāo)記生物素的探針雜交來(lái)檢測(cè)。通過(guò)底物酶的培養(yǎng)后，樣品的結(jié)果可以通過(guò)肉眼判別或者酶標(biāo)儀來(lái)讀取。本試劑盒使用嗜肺軍團(tuán)菌及軍團(tuán)屬的特異引物，可與樣本中的嗜肺軍團(tuán)菌及軍團(tuán)屬基因組的相應(yīng)靶位點(diǎn)特異性結(jié)合，利用PCR反應(yīng)達(dá)到對(duì)嗜肺軍團(tuán)菌及其他軍團(tuán)菌快速檢測(cè)的目的。試劑盒具有特異性強(qiáng)的特點(diǎn)，可以將嗜肺軍團(tuán)菌及其他軍團(tuán)菌從其它細(xì)菌中特異地區(qū)分出來(lái)。
 
軍團(tuán)菌PCR檢測(cè)試劑盒用于食品、飲用水、臨床樣品以及環(huán)境樣品中的嗜肺軍團(tuán)菌及其他軍團(tuán)菌的檢測(cè)。
【樣品處理】
1. 取可疑菌落于高壓滅菌的裝有1ml去離子水的離心管中，12000rpm離心2min，棄上清。
2. 加入200μl無(wú)菌水，充分混勻，12000rpm離心2min，棄上清。
3. 加入80μl核酸提取液，用移液器吹吸混勻，50℃水浴1小時(shí)，100 ℃ 水浴15分鐘，冰上放置10分鐘后12000rpm離心3min。
4. 取上清液用于PCR檢測(cè)。
【使用方法】
1. 試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
從軍團(tuán)菌PCR檢測(cè)試劑盒中取出PCR反應(yīng)液在室溫融化，將PCR反應(yīng)液充分震蕩混勻，所有試劑在使用前2000rpm離心10s。設(shè)所需要的管數(shù)n（n=樣本數(shù)+1管陽(yáng)性對(duì)照品+1管陰性對(duì)照品），每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系試劑配置如下表。計(jì)算所需要的n管反應(yīng)的各試劑的使用量，加入至適當(dāng)體積的無(wú)菌離心管中，充分混合均勻，分裝至無(wú)菌PCR反應(yīng)管中，每管20μl。每個(gè)反應(yīng)體系試劑用量：PCR反應(yīng)液19.7μl ，Taq酶0.3μl
2.  PCR擴(kuò)增（擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)）
將樣本、陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品使用前恢復(fù)至室溫，2000rpm離心10s。向每個(gè)
PCR反應(yīng)管中分別加入樣本、陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品各5μl，震蕩混勻，于2000rpm
離心10s。將PCR管放入PCR儀中，使用以下程序進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，整個(gè)擴(kuò)增反應(yīng)約
需2小時(shí)。
3.   結(jié)果判斷（擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)）
從PCR管中取出2μl PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。在紫外燈下，陰性對(duì)照品沒(méi)有任何條帶；軍團(tuán)菌陽(yáng)性對(duì)照品具有大小為270bp和354bp的兩條帶；其中270bp的條帶為軍團(tuán)菌屬特異的條帶，而354bp則為嗜肺軍團(tuán)菌種特異的條帶。當(dāng)被檢樣品經(jīng)電泳檢測(cè)出現(xiàn)僅出現(xiàn)270bp大小的條帶時(shí)則屬于軍團(tuán)菌（非嗜肺軍團(tuán)菌）陽(yáng)性，若出現(xiàn)270bp和354bp的兩條帶則屬于嗜肺軍團(tuán)菌陽(yáng)性；當(dāng)未出現(xiàn)條帶或所出現(xiàn)的條帶大小與陽(yáng)性對(duì)照品的條帶大小不一致時(shí)均視為陰性結(jié)果。
【注意事項(xiàng)】
1.   本試劑盒不做臨床診斷。
2.   實(shí)驗(yàn)室管理應(yīng)嚴(yán)格按照PCR基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的管理規(guī)范，試驗(yàn)人員必須進(jìn)行專業(yè)培訓(xùn)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中嚴(yán)格分區(qū)進(jìn)行（試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)、擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)），實(shí)驗(yàn)操作的每個(gè)階段使用專用的儀器和設(shè)備，各區(qū)用品不能交叉使用。
3.  樣本準(zhǔn)備和試劑準(zhǔn)備階段應(yīng)使用生物安全柜，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中穿工作服，帶一次性手套，使用自卸管移液器。
4.  對(duì)每次實(shí)驗(yàn)進(jìn)行質(zhì)量控制。
5.  試劑使用前要完全解凍，并混合均勻，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
6.  樣本制備區(qū)所用過(guò)的吸頭請(qǐng)打入盛有消毒劑的容器，并與廢棄物一起滅菌后方可丟棄。
7.  實(shí)驗(yàn)完畢用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器。
8. 所有檢測(cè)樣品應(yīng)視為具有傳染性物質(zhì)，操作和處理均需符合相關(guān)法規(guī)要求：衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則》和《醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例》。
【軍團(tuán)菌PCR檢測(cè)試劑盒主要組成部分】

軍團(tuán)菌PCR檢測(cè)試劑盒	組份	規(guī)格	數(shù)量	貯存溫度
	核酸提取液	1ml/支	2支	-20℃
	軍團(tuán)菌 PCR反應(yīng)液	500μl /支	1支
	Taq酶	12μl /支	1支
	軍團(tuán)菌陽(yáng)性對(duì)照品	100μl /支	1支
	陰性對(duì)照品	100μl /支	1支

【儲(chǔ)藏條件及有效期】    
-20℃保存，避免反復(fù)凍融，有效期一年。
 
 
軍團(tuán)菌PCR檢測(cè)試劑相關(guān)產(chǎn)品：
軍團(tuán)菌分型血清（大套，中套，小套）
軍團(tuán)菌生化鑒定套裝（含馬尿酸鹽，硝酸鹽還原等7種生化鑒定試劑）
360nm紫外燈
GVPC平板
BCYE平板
BCYE-CYS平板
軍團(tuán)菌陽(yáng)性對(duì)照菌株
廈門敏測(cè)供應(yīng)以上軍團(tuán)菌檢測(cè)系列產(chǎn)品，詳情請(qǐng)來(lái)電咨詢。