培養(yǎng)基溶解配制用水加熱滅菌PH廢棄處理問(wèn)題集錦

1、培養(yǎng)基配制用水
培養(yǎng)基配制用水最好是蒸餾水，用純凈水和去離子水有可能會(huì)影響最終結(jié)果，原因在于：用于制備純凈水和去離水的原水中如果存在大量的微生物的話，雖然在制備過(guò)程中能夠除去微生物，但不能除去微生物代謝產(chǎn)物，這些代謝產(chǎn)物可能會(huì)影響或抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)！另外，水的電阻率在25℃時(shí)應(yīng)≥300000Ω•cm。具體可參考SN/T1538.1-2016.培養(yǎng)基制備指南 第一部分：實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基制備質(zhì)量保證通則[S]。
GB4789.28中規(guī)定實(shí)驗(yàn)用水的電導(dǎo)率在25℃時(shí)不應(yīng)超過(guò)25 μS/cm(相當(dāng)于電阻率≥0.4 ΜΩcm)，除非另有規(guī)定要求。水的微生物污染不應(yīng)超過(guò)10³ CFU/mL。
pH 5.5-7.5，否則可能造成培養(yǎng)基顏色異常、產(chǎn)生沉淀或凝膠強(qiáng)度下降。
儲(chǔ)存于惰性容器（如：玻璃、聚乙烯材質(zhì)容器）中，容器應(yīng)清洗干凈，
防止抑制劑殘留。
 
2、培養(yǎng)基配制溫度
濕熱滅菌在高壓鍋或培養(yǎng)基制備器中進(jìn)行，高壓滅菌一般采用121 ℃±3 ℃滅菌15 min，具體培養(yǎng)基按食品微生物學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)中的規(guī)定進(jìn)行滅菌。培養(yǎng)基體積不應(yīng)超過(guò)1000 mL，否則滅菌時(shí)可能會(huì)造成過(guò)度加熱。加熱后采用適當(dāng)?shù)姆绞嚼鋮s，以防加熱過(guò)度。這對(duì)于大容量和敏感培養(yǎng)基十分重要，例如含有煌綠的培養(yǎng)基。
某些培養(yǎng)基不能或不需要高壓滅菌，可采用煮沸滅菌，如SC肉湯等特定的培養(yǎng)基中含有對(duì)光和熱敏感的物質(zhì)，煮沸后應(yīng)迅速冷卻，避光保存；有些試劑則不需滅菌，可直接使用（參見(jiàn)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)或供應(yīng)商使用說(shuō)明）。
 
3、培養(yǎng)基配制容器
制備培養(yǎng)基常用的容器為玻璃、不銹鋼、鋁鍋或搪瓷容器。不宜使用銅或鐵鍋。培養(yǎng)基中的含銅量過(guò)高時(shí)（＞0.3mg/1000ml），細(xì)菌不易生長(zhǎng)；含鐵量過(guò)高時(shí)（＞0.14mg/1000ml），則妨礙細(xì)菌毒素的產(chǎn)生。
 
4、培養(yǎng)基溶解
小心稱量所需量的脫水合成培養(yǎng)基（必要時(shí)佩戴口罩或在通風(fēng)柜中操作，以防吸入含有有毒物質(zhì)的培養(yǎng)基粉末），先加入適量的水，充分混合（避免在濕度過(guò)高的環(huán)境下操作，防止培養(yǎng)基受潮結(jié)塊），然后加水至所需的量后適當(dāng)加熱，并重復(fù)或連續(xù)攪拌使其快速分散，必要時(shí)應(yīng)完全溶解。含瓊脂的培養(yǎng)基在加熱前應(yīng)浸泡幾分鐘。
有顆粒劑的培養(yǎng)基推薦使用顆粒劑培養(yǎng)基，減少粉塵吸入。
加水溶解后，應(yīng)適當(dāng)加熱并攪拌，加快培養(yǎng)基的溶解。推薦使用帶加熱功能的磁力攪拌器加速溶解。
 
5、培養(yǎng)基煮沸加熱
培養(yǎng)基煮沸滅菌用的什么加熱工具
答1：我們用磁力加熱攪拌器，一般用來(lái)煮500ml的，可能我們樣品量少
答2：我們用電磁爐，放在帶刻度的不銹鋼缸子里煮，加熱的時(shí)候用藥匙攪拌
答3：為您提供一種快速便捷的方式
第一步：采用微波爐適當(dāng)加熱，短時(shí)間（10s左右）多次加熱溶解，避免溢出。第二步：在電爐上繼續(xù)加熱至沸騰
電爐，按需配置一定量裝錐形瓶，墊石棉網(wǎng)煮沸，不間斷拿下?lián)u勻，避免溢出。
答4：用過(guò)老式電爐+石棉網(wǎng)、電熱套、微波爐、電陶爐；綜合安全和效率，覺(jué)得還是電陶爐好用些
 
6、培養(yǎng)基復(fù)溶
經(jīng)過(guò)高壓滅菌的培養(yǎng)基應(yīng)盡量減少重加熱時(shí)間，避免過(guò)度加熱。培養(yǎng)基融化后放入47±2℃的恒溫水浴鍋中保溫，直至使用，放置時(shí)間一般不應(yīng)超過(guò)4h。*如果不能在4h內(nèi)及時(shí)使用，應(yīng)迅速冷卻，使其凝固，使用前再進(jìn)行復(fù)溶。
未用完的培養(yǎng)基不能重新凝固留待下次使用。敏感的培養(yǎng)基尤其應(yīng)該注意，融化后時(shí)間應(yīng)盡量縮短；* 不可反復(fù)復(fù)溶，否則會(huì)影響培養(yǎng)基的pH值和凝膠強(qiáng)度。
恒溫水浴鏈接：
 
7、培養(yǎng)基滅菌
高壓滅菌、煮沸滅菌、過(guò)濾除菌（采用0.2μm的濾膜）
注：用高壓滅菌的方式對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌時(shí)，應(yīng)對(duì)培養(yǎng)基的滅菌過(guò)程進(jìn)行監(jiān)控。
• 物理監(jiān)控和生物監(jiān)控   （滅菌指示膠帶，濕熱滅菌生物指示劑鏈接：）
 
8、培養(yǎng)基分裝
儲(chǔ)存于惰性容器（如：玻璃、聚乙烯材質(zhì)容器）中；將培養(yǎng)的培養(yǎng)基分裝至容器中，培養(yǎng)基的體積不超過(guò)所用容器的3/5；培養(yǎng)基滅菌時(shí)，總體積應(yīng)小于1000ml；液體培養(yǎng)基如乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基分裝時(shí)可使用大容量電子移液器或電子分液器。
 
9、培養(yǎng)基PH測(cè)定
滅菌前后測(cè)定培養(yǎng)基的pH值；pH ±0.2；
1 mol/L的 NaOH 或 Hcl來(lái)調(diào)整pH值；
商品化的培養(yǎng)基一般不需要調(diào)整pH值，但需測(cè)定pH是否在規(guī)定范圍內(nèi)。
固體培養(yǎng)基PH計(jì)可使用固體培養(yǎng)基專業(yè)PH計(jì)
 
10、培養(yǎng)基保存
干粉培養(yǎng)基的保存遵循先進(jìn)先出的原則、保存開(kāi)封的記錄、超過(guò)保質(zhì)期的培養(yǎng)基需丟棄、
開(kāi)蓋后密封，低于25℃保存、儲(chǔ)存時(shí)避免吸水，氧化，污染。
 
11、廢棄培養(yǎng)基處理
所有污染和未使用的培養(yǎng)基的棄置應(yīng)采用安全的方式，并且要符合相關(guān)法律法規(guī)的規(guī)定。
網(wǎng)友推薦程序：
一、經(jīng)培養(yǎng)的污染材料及廢棄物應(yīng)放在嚴(yán)密的容器或鐵絲筐內(nèi)，集中放在統(tǒng)一地點(diǎn)，待統(tǒng)一進(jìn)行高壓滅菌。
二、經(jīng)微生物污染的培養(yǎng)物，須經(jīng)121℃30分鐘高壓滅菌；
三、染菌后的吸管、加樣槍頭，使用后放在5%煤酸皂溶液中，最少浸泡24小時(shí)，再經(jīng)121℃30分鐘高壓滅菌；
四、涂片染色沖洗片的液體，一般可直接沖入下水道，烈性菌的沖洗液必須沖在燒杯中，經(jīng)高壓滅菌后，方可倒入下水道。染色玻璃片放入5%煤酸皂中浸泡24小時(shí)，煮沸洗滌。做凝集試驗(yàn)用的玻片或平皿，須經(jīng)高壓滅菌后再洗滌；
五、 打碎的培養(yǎng)物，立即用5%煤酸皂溶液噴灑和浸泡被污染部位，浸泡半小時(shí)后再擦試干凈；
六、污染的工作服或進(jìn)行烈性菌試驗(yàn)所穿的工作服、帽、口罩等，應(yīng)放在專用的消毒袋內(nèi)，經(jīng)高壓滅菌后方能洗滌。
 
其他培養(yǎng)基相關(guān)內(nèi)容問(wèn)答
標(biāo)簽：培養(yǎng)基、高壓滅菌，乳糖膽鹽、分開(kāi)滅菌
問(wèn)：1、“請(qǐng)教你一個(gè)培養(yǎng)基高壓滅菌的問(wèn)題。說(shuō)明書(shū)上：平板計(jì)數(shù)培養(yǎng)基加熱溶解121攝氏度滅菌15分鐘，乳糖膽鹽發(fā)酵管培養(yǎng)基經(jīng)115攝氏度15分鐘滅菌。我想問(wèn)下，我把2者一同在高壓鍋滅菌121到126攝氏度時(shí)間20分鐘，這樣可以嗎？或2者一同在高壓鍋滅菌121到126攝氏度時(shí)間15分鐘可以嗎？”
答：-----不可以，乳糖膽鹽發(fā)酵管培養(yǎng)基經(jīng)115攝氏度15分鐘滅菌的目的是防止高溫導(dǎo)致多糖碳化。
問(wèn)：“覺(jué)得2個(gè)培養(yǎng)基分開(kāi)滅菌覺(jué)得浪費(fèi)，再一起滅菌不知怎樣做才標(biāo)準(zhǔn)”？
-答：----沒(méi)有規(guī)矩不成方圓。不可一起滅菌。
 
標(biāo)簽：培養(yǎng)基配制
問(wèn)：在進(jìn)行煮沸滅菌培養(yǎng)基配置過(guò)程中如何避免液體噴灑出來(lái)被燙傷的情況，有什么好的滅菌方法，又可以有效防護(hù)？
答：選擇大一點(diǎn)的容器，少盛放點(diǎn)培養(yǎng)基，防護(hù)最好放上石棉網(wǎng)，帶上高溫手套，有專人看守。
 
標(biāo)簽：培養(yǎng)基，（試劑）驗(yàn)收程序
問(wèn)：4.6.1a)要求制定培養(yǎng)基（試劑）驗(yàn)收程序；4.6.1b)要求制定培養(yǎng)基質(zhì)量控制程序。
是否可以只制定培養(yǎng)基（試劑）質(zhì)量控制程序，內(nèi)容包括驗(yàn)收及自制培養(yǎng)基的質(zhì)量控制。
答：貴實(shí)驗(yàn)室自制培養(yǎng)基嗎？如果是，則執(zhí)行GB 4789.28-2013   6.1。
如果否，如使用商業(yè)干粉培養(yǎng)基，則執(zhí)行GB 4789.28-2013    6.2即可
商品化培養(yǎng)基按附件E進(jìn)行質(zhì)量控制
 
標(biāo)簽：培養(yǎng)基保溫
問(wèn)：滅菌后培養(yǎng)基的保溫能否用60℃的培養(yǎng)箱，它與45~55℃水浴鍋保溫方法有何不同？
答：----最好使用45~55℃水浴鍋保溫方法；
----前者“氣保”，后者“水保”。
 
標(biāo)簽：培養(yǎng)基,PH計(jì)
問(wèn):請(qǐng)問(wèn)下商品化的培養(yǎng)基驗(yàn)收時(shí)，要測(cè)試PH值，有些瓊脂滅菌后25℃時(shí)已經(jīng)凝固了，是否可以在滅菌前進(jìn)行？
答：使用穿插式PH計(jì)或平頭電極，有專業(yè)的固體培養(yǎng)基專用電極可測(cè)固態(tài)瓊脂pH
 
問(wèn)：Vrba培養(yǎng)基勿需高壓滅菌的原因是什么 ？
答：VRBA即結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂具有一定的選擇性，不易生長(zhǎng)雜菌，在其上面只大腸菌群顯色，其它的菌落不會(huì)顯示顏色的。再說(shuō)，煮沸也是滅菌。
VRBA菌落顯紅色的原理是菌株利用乳糖產(chǎn)酸，中性紅遇酸變紅，因此菌落也是紅色的，并且因?yàn)槔锩嬗心扄}，在較低pH值時(shí)會(huì)出現(xiàn)沉淀環(huán)，就是我們看到的菌落周圍的暈圈了。
但某些不利用乳糖產(chǎn)酸的細(xì)菌如沙門在VRBA表面生長(zhǎng)時(shí)是無(wú)色的，但是跑到培養(yǎng)基內(nèi)部就會(huì)變成紅色了，這種菌會(huì)影響我們的判斷，因此需要做BGLB來(lái)確證。
 
培養(yǎng)基配制用什么容器
問(wèn)：每天需要用大量培養(yǎng)基，用2L燒杯配制還是嫌小了，如果用大的不銹鋼鍋，每批就可以配很大量，不知道有什么不符合的說(shuō)法嗎？是分裝到三角燒瓶或者試管再滅菌的。主要考慮到批次管理，所以想一次性用一個(gè)大鍋來(lái)溶解干粉，以鍋?zhàn)鳛橐粋€(gè)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基批次。不知道是否可行？
答：可以的，先用一個(gè)大的不銹鋼配制好，然后分裝到三角燒瓶或試管在滅菌
追問(wèn)：每個(gè)月有一兩天需要配制上千瓶培養(yǎng)基，考慮分裝的問(wèn)題，有誰(shuí)使用過(guò)蠕動(dòng)泵之類的分裝設(shè)備啊？從配制到滅菌之間的時(shí)間怎么控制才好？記得USP里面有規(guī)定2小時(shí)內(nèi)，但是分裝的量大呀……
答：可以考慮培養(yǎng)基分裝器（蠕動(dòng)泵）
 
問(wèn)：培養(yǎng)基煮沸滅菌（無(wú)需高溫高壓）具體都怎么操作。比如煮沸過(guò)程要加塞子么，煮沸后直接進(jìn)入無(wú)菌室冷卻倒板還是放水浴鍋等等
答：煮沸過(guò)程當(dāng)然要蓋上啊，但是不建議用塞子，可以用錫紙啊，另外有時(shí)刻看著啊
 煮沸后直接進(jìn)入無(wú)菌室冷卻倒板還是放水浴鍋等等，應(yīng)該都可以吧??！反正是冷卻過(guò)程啊
 
問(wèn)：怎樣制作斜面培養(yǎng)基呢
答：配制固體培養(yǎng)基，分裝入試管，包扎，滅菌，擺斜面，冷卻即可
主要把握分裝的量~~
 
問(wèn)：一個(gè)培養(yǎng)箱，培養(yǎng)兩種不同溫度的培養(yǎng)基，怎么培養(yǎng)？
答：你說(shuō)的可能是細(xì)菌培養(yǎng)、霉菌培養(yǎng)，這要兩個(gè)培養(yǎng)箱，霉菌培養(yǎng)不僅有溫度要求還有濕度要求。
其他回答：做無(wú)菌檢查至少要2個(gè)培養(yǎng)箱
 
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