微生物常見問題問答（一）

微生物常見問題問答--節(jié)選自廣東藥檢所2010藥典微生物專題問答。
微生物常見問題，藥典培訓專題問答，節(jié)選內(nèi)容比較具有代表性，部分內(nèi)容適用于食品，化妝品微生物行業(yè)。

菌落計數(shù)是否需要將每天計數(shù)的數(shù)據(jù)登記在記錄本上，是否可以只記錄最終的數(shù)據(jù)？
答：可以。每天計數(shù)的目的是預防菌落彌漫互相覆蓋，干擾最終的點計。你可以用油性筆將每天點計的數(shù)記錄在培養(yǎng)皿上，發(fā)報告時只要最終菌落數(shù)就行了。
 
若樣品中有不溶物（如片劑中的輔料顆粒），經(jīng)常會影響培養(yǎng)前期的結(jié)果，藥典要求逐日計數(shù)，所以報告中會出現(xiàn)第二、三日菌落數(shù)小于第一日的現(xiàn)象，請問該如何向客戶或監(jiān)檢機構(gòu)解釋這種結(jié)果？或者是否可以不計第一、二日菌落數(shù)，待輔料顆粒與菌落可以區(qū)分后再計數(shù)？
答：報告書不需要顯示第一、第二天的結(jié)果，只需報告最終結(jié)果。理由請見第9題答復?；蛘呤窃跔I養(yǎng)瓊脂中加入TTC試劑（每100ml加入0.1%）
 
采用薄膜過濾法時，濾膜采用何種方法滅菌最好？
答：據(jù)我們經(jīng)驗，最好采用一次性過濾器。如果用多次使用的過濾器，則濾膜用濕熱滅菌比較好，因為干熱滅菌后，濾膜較脆，試驗時不容易保證濾膜完整。
 
菌液涂布時，用接種棒還是涂布棒涂？
答：用L型涂布棒，也可用玻棒自制。
 
大腸菌群檢查，需陽性對照嗎？
答：要的。陽性對照菌為大腸埃希菌。
 
如何避免菌落成片？
答：1、培養(yǎng)基傾注時溫度不宜過高，可減少傾注后培養(yǎng)皿里的水蒸汽太多而造成菌落容易漫延，或者加蓋“陶瓦蓋”吸收水蒸汽；2、細菌計數(shù)時，在每100ml營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中加入滅菌的1%氯化四氮唑0.1ml，可使生成的菌落變紅色，容易點計，也可在一定程度上抑制菌落漫延。
 
微生物檢驗時，勻漿機應(yīng)把轉(zhuǎn)速調(diào)到多少才不會對微生物有損傷？
答：沒有相關(guān)的規(guī)定，目前一般使用轉(zhuǎn)速為3000-4000轉(zhuǎn)/分鐘。
 
生物指示劑對滅菌設(shè)備的性能，滅菌程序的驗證是只驗證一次呢，而后進行定期驗證，如果生物指示劑換批號，是否要重新驗證？
答：應(yīng)定期或不定期驗證一次，確保滅菌設(shè)備正常。生物指示劑更換批號，不需重新驗證。
 
紫外線滅菌后，需要多久進去操作？
答：打開通風凈化設(shè)備，半小時后可入內(nèi)操作。
 
培養(yǎng)基在冷藏中形成結(jié)晶怎么處理？①銷毀 ②加熱再用 ③待冷卻完用
答：建議不要使用
 
融化的培養(yǎng)基為什么不能再冷水中冷卻？
答：防止受熱不均引起結(jié)塊
 
商品培養(yǎng)基干粉說是加蒸餾水溶解，實際操作是否可以用純化水或注射用水？
答：只要不含有任何可能抑制或影響微生物生長的物質(zhì)的水均可。
 
如何檢查黑曲霉孢子懸浮液孢子含量為50~100個／ml。銅綠假單胞菌單菌如果用甘油冷凍管，也是低溫，是否也會影響它的活性？應(yīng)如何保存？
答：可用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基或改良馬丁瓊脂來確定黑曲霉孢子懸浮液。銅綠假單胞菌應(yīng)使用最終甘油濃度為20%的甘油凍存管保存，保存在-30℃或更低溫度，則可保持其活性。若是斜面或營養(yǎng)肉湯，建議室溫保存。
 
第一代菌種可不可以作為工作菌株使用？
 答：我們不這樣使用，因為擔心菌株沒有充分復壯，生化特性可能不典型。
 
制備菌懸液時，要使其在10~100cfu中，應(yīng)多注意的地方是什么？
答：制定標準化操作規(guī)程，減少不同實驗者帶來的誤差，接種量、培養(yǎng)溫度和時間應(yīng)每次一致。
 
銅綠假單胞菌貯存溫度應(yīng)為多少度？
答：一般在10℃以上，甘油凍存管至少在-30℃以下。
 
如何比較快速有效判斷菌液的濃度？除了可以用“比濁儀”參考，還有什么方法？
答：比濁儀只做輔助參考，還需通過平板計數(shù)來最后確認菌液的濃度。
 
若沒有比濁儀，用什么方法來確認50~100cfu/ml？特別是孢子？
答：孢子計數(shù)建議通過平板計數(shù)的方法來確定濃度。
 
在做方法驗證時，黑曲霉菌濃度大于20cfu/皿時，培養(yǎng)5天后菌落蔓延擴散，無法各個區(qū)分，如何在藥典要求的50~100cfu和實際操作結(jié)果中找到平衡？因為菌濃對回收率及操作RSD%影響很多.
答：培養(yǎng)48-72h后，菌落剛形成時，及時點計并做記號，然后每天觀察有無新的菌落長出并計數(shù)。
 
大腸生化實驗中的靛基質(zhì)試驗（I）項結(jié)果為“+”或者“-”均不影響最終結(jié)果的判斷，請問該項的意義何在？是否可以取消？
答：反應(yīng)為+，為典型大腸埃希氏菌，-為非典型大腸埃希菌。關(guān)系到最終判斷，都是必須的實驗，不可取消。
 
銅綠假單胞菌用什么方法保存及更活處理方法？
答：建議采用甘油凍存管（終濃度為20%的甘油凍存管），-30℃（或更低溫度）保存。
 
革蘭氏染色前，菌落是否要先純化（接到營養(yǎng)瓊脂斜面上）還是直接從選擇性培養(yǎng)基上挑起菌落直接染色？
答：要純化，從選擇性培養(yǎng)基挑取單個菌落，最好先接到營養(yǎng)瓊脂斜面后，再進行染色。
 
請介紹一下，有什么簡便的方法滅菌甘油？
答：高壓濕熱滅菌法
 
 20%甘油v∕v是用水還是用相應(yīng)培養(yǎng)基做稀釋？
答：用相應(yīng)的培養(yǎng)基。
 
清潔無菌室所用消毒液如何做到無菌拖把、拖桶如何做到無菌？
答：消毒液可采用過濾的方法。無菌拖把、拖桶可采用浸泡、高溫滅菌的方法。
 
貴所日常所用的消毒液是哪些？
答：新潔爾滅、消毒粉、75%酒精、來蘇兒。
 
消毒液本來就是用來消毒殺菌的，又怎么會存在消毒液是否無菌這一說法？
答：消毒液不是萬能的，對絕大對數(shù)菌有效，不排除對有些微生物無效。  有些消毒劑質(zhì)量難保證，如果有效成分濃度過低甚至無，則達不到滅菌效果。
 
能否直接用電磁爐煮培養(yǎng)基（加熱）？最佳加熱方法是？
答：電磁爐不能加熱玻璃瓶。我們所：水?。?00℃），微波爐。
 
生物安全柜，凈化操作臺每年是否需要檢定？
答：是的，我所是每年檢定一次。并定期檢測潔凈度，頻次自己制訂。
 
潔凈區(qū)監(jiān)控中，某些設(shè)備不宜采用沖淋法和接觸碟法取樣，而擦拭法中棉簽釋放率很低（普通棉簽釋放率只有20%左右）。請問如何設(shè)計采樣方法才能真實反映設(shè)備表面微生物情況？
答：有些國外生產(chǎn)微生物檢驗儀器的大公司，有專用的小拭子，可能更有效。
 
潔凈區(qū)有霉菌生長，要怎么凈化環(huán)境？注：我們用75%的乙醇抹洗全部空間，然后開臭氧半小時，但是檢測后還是發(fā)現(xiàn)有霉菌，老師是不是還有更好的方法？
答：可嘗試甲醛熏蒸

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